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?高效液相色谱（HPLC）分离效果好，速度快，样品容量大，回收率高，已经成为一种分析和纯化生物分子广泛而可靠的方法。HPLC在肽、蛋白质分析和纯化方面的重要作用在于它的分离度：HPLC能够分离具有几乎同样序列的多肽，这不仅包括那些胰岛素消化物中的小肽，还包括更大的肽。仅相差一个氨基酸残基的多肽通常可以用RP-HPLC分离。胰岛素变异物的分子量都在5300左右,只是在氨基酸序列上有轻微的不同，即使这样，大部分的变异物都可以用RP-HPLC分离。特别的是，反相色谱能分离人和兔的胰岛素，两者仅在于一个亚甲基的不同——兔胰岛素有一个苏氨酸，而人胰岛素有一个丝氨酸！其次，高效液相色谱在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成对多肽的分离目的，更重要的是该法能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。

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??????1、HPLC用于分离酶消化产物中的??肽碎片，纯化天然肽及合成肽。制备RP-HPLC常常用于纯化克及毫克量的合成肽。

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??2、HPLC能用于分离血红蛋白变体，鉴别微粒种类，研究酶亚基和细胞功能。??

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3、HPLC还能纯化用于序列测定的微量级肽，并纯化治疗用的毫克级到千克级生物技术衍生多肽。???

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从植物、动物、微生物等天然材料中发现结构新颖且具有药理活性的天然产物并进一步开发成新药，是人类预防和治疗疾病的重要渠道，也是国际天然产物领域关注的研究方向。天然产物的组分非常复杂，如中草药中各组分含量多少对药剂作用影响很大。采用高效、高分辨、多功能的分离技术是开展天然产物研究的关键环节之一。近十几年来，制备型高效液相色谱法（HPLC）是天然产物化学研究中应用非常普遍、非常有效和相关技术发展非常快的分离纯化方法，在天然产物领域研究中具有不可替代的地位。

采用HPLC不仅能从天然产物中分离得到高纯度的化合物单体，而且产率高，速度快，操作简便，便于收集。

(1) HPLC分离纯化糖类及其衍生物

(2) HPLC分离纯化萜类化合物

(3) HPLC分离纯化黄酮类化合物

(4) HPLC分离纯化生物碱类化合物

(5) HPLC分离纯化苷类化合物

(6) HPLC分离纯化有机酸类化合物

(7) HPLC分离纯化香豆素类化合物

(8) HPLC分离纯化甾体类化合物

高效液相色谱法是现代药物制造中非常高效、快捷的方法之一，具有专属性强、灵敏度高等特点，既可用于药物分离，也可用于定性定量分析，适用范围广。因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决，HPLC将成为今后质量规范化、国际化的途径之一。

1、药物鉴别

方法简便准确，专属性强，重复性好，可用于控制中药制剂的内在质量。

在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。如《中国药典》收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。

2、杂质检测

原料、中间体、副产物等在制造过程中产生的杂质的检测与分离

3、含量测定

用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰，因此药物成分含量测定中HPLC法应用最广泛。

4、手性药物拆分

手性药物分离是药物研发领域的热点，手性化合物在医学工业和人体代谢方面已经引起人们越来越多的关注。高效液相色谱法（HPLC)是手性药物拆分的主要方法，应用广泛，对大部分手性药物几乎都能实现分离,在手性药物质量控制、立体选择性的药理学和毒理学研究等方面起着重要的作用，具有十分广阔的应用和发展前景。

高效液相色谱因具有高灵敏度和低检测限的特性，已逐渐成为我国食品检测中常用的高灵敏度、高通量的分析方法。近年来，随着色谱技术的不断发展，各种工作站软件的开发，以及与质谱等仪器的联用， HPLC 的应用范围大大拓宽。目前，很多新型专用的 HPLC 食品分析仪相继出现，如氨基酸分析仪、糖分析仪、离子色谱仪等。我国HPLC在食品分析领域的应用始于 70 年代末，90 年代后期国 家标准中开始将 HPLC 法列为检测食品中的污染物、营养成分、添加剂、毒素、无机成分等的国标方法?。

??1、食品营养成分分析检测

????蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等。??

??2、食品安全检测

①食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着?色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等。

②食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、牛奶中的三聚氰胺、激素、农药残留等的检测；加工过程中的监控

1、遗传学领域

变性高效液相色谱法(DHPLC)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法，是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术。DHPLC采用高压闭合液相流路，将DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下，由荧光检测被分离的DNA样品，从而实现对DNA不同的分析，它因使用的温度不同而具有不同的应用价值。其原理是通过HPLC在部分变性的条件下将发生错配的异源杂合双链DNA与完全匹配的同源双链DNA分离开来。该方法具有自动化、准确快速、检出率高等特点，现已广泛应用于与人类疾病相关基因的突变分析。

2、医学领域

HPLC在测定蛋白活性上有重要的应用。应用HPLC测定肝细胞色素P450活性对新药临床安全性评价和药物相互作用研究具有重大意义。

3、在添加违禁药物检查中的应用

近年来，食品、药品、保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件，这类成分往往对患者造成病情不受控制、药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。高效液相色谱对添加违禁药物的日常检验工作提供了有力的技术支持。